1D3細胞為懸浮生長，建議使用RPMI-1640培養基（含10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素）進行常規培養。培養前需確保超凈工作臺紫外滅菌30分鐘，所有操作器械（移液器、槍頭、培養瓶等）均經過高壓滅菌處理。細胞復蘇時需提前將培養基置于37℃水浴預熱，凍存管從液氮中取出后立即放入37℃水浴快速解凍，離心（1000rpm, 5分鐘）去除凍存液后重懸于新鮮培養基中，接種于T25培養瓶，置于37℃、5% CO?培養箱中靜置培養。
               
 傳代與擴增
當細胞密度達到1×10?/mL時需進行傳代。輕輕吹打混勻細胞懸液，按1:2至1:3比例分裝至新培養瓶，補充預熱培養基至總體積5mL。若需大規模擴增，可逐級放大至T75培養瓶或細胞工廠，但需注意保持接種密度不低于5×10?/mL，以避免生長滯緩。

凍存與質量控制
選擇對數生長期細胞，離心后以凍存液（90%血清+10% DMSO）重懸至5×10?/mL，分裝至凍存管，程序降溫后轉入液氮長期保存。定期檢測細胞活力（臺盼藍拒染法＞95%）和支原體污染（PCR法），并通過流式細胞術驗證表面標志物CD15、CD11b的表達以確認細胞系特性。

注意事項
1. 換液時避免劇烈震蕩，防止機械損傷；
2. 若出現異常聚團，可用40μm細胞篩過濾；
3. 每3代進行一次STR鑒定，確保細胞遺傳穩定性。
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